Bacterias Gram - y Gram +
Las bacterias se clasifican en dos grandes grupos: las Gram - y las Gram +.
La diferencia entre estos dos tipos de bacterias es su envoltura celular.
Las bacterias Gram – tienen, como se aprecia en el dibujo (pido mil perdones por la calidad de los dibujos), una bicapa lipídica interior seguida de una capa fina de peptidoglucano y otra bicapa lipídica.
Las bacterias Gram + poseen solo la membrana interior y la de peptidoglucano, siendo esta última más gruesa que en las bacterias Gram -.
¿Por qué lo de Gram – y Gram +?
Esta denominación es gracias al bacteriólogo danés Christian Gram, el cual diseñó la técnica de tinción de Gram. Si después de realizar la tinción, las bacterias poseen color violeta son Gram+. Si no lo tienen Gram -.
Explicamos un poco la tinción para entender el proceso.
Extender la muestra en un porta y fijarlas con calor
Añadir el azul de metilo y esperar un minuto. Este entrará en todas las bacterias, tanto las Gram + como las Gram-
Enjuagar con agua para eliminar excesos, recordemos que las bacterias están fijadas al cristal del porta.
Agregar lugol. Este es un disolvente que actúa sobre el violeta del campo (no el fijado en las bacterias)
Enjuagar con agua
Añadir alcohol/acetona y dejar entre 5 y 30 segundos. Las Gram – “pierden el violeta y se decoloran.
Enjuagar con agua
Se puede añadir fucsina para realizar una coloración contraste. Las Gram – que no tenían color violeta se verán rosa pálido.
¿Por qué se fija en unas y no en otras?
Clásicamente se pensaba que la acetona deshidrataba a los peptidoglucanos de las bacterias Gram +, creando una cubierta como si fuera “plástico” que impedía que el violeta escapase.
Por el contrario, en las Gram - disolvía los lípidos de la bicapa exterior, y como la capa de peptidoglucanos era mucho menor no se creaba esta cubierta “plástica” y el violeta escapaba.
Reciente estudios han demostrado que esto no es así. El violeta de metilo no atraviesa las membranas.
La teoría que proponen es que el violeta se fija a los peptidoglucanos. En Gram – la capa de peptidoglucanos es muy fina con lo que la tinción es mucho menor y más débil, mientras que en Gram + como es mucho mayor, formada por diversas capas de peptidoglucanos y además situados en el exterior, el violeta se fija con más facilidad, en mayor cantidad y de una forma más fuerte.
Para más información: Gram´s Stain Does Not Cross the Bacterial Cytoplasmic Membrane
